Микологическое исследование (посев) на дрожжжевые грибы (родов Candida spp , Cryptococcus spp и других) с определением чувствительности к антимикотическим препаратам при выявлении возбудителя

Простейшие дрожжеподобные грибы рода Candida, насчитывающего более 170 видов, в небольшом количестве встречаются в составе нормальной микрофлоры полости рта, влагалища, желудочно-кишечного и мочеполового тракта у здоровых людей. Они являются условно-патогенными организмами: при определенных условиях, способствующих бурному размножению этих грибов (нарушении иммунитета, ВИЧ-инфекции, приеме антибиотиков широкого спектра действия, иммунодепрессантов, кортикостероидов или оральных контрацептивов с высоким содержанием эстрогенов, онкологических заболеваниях, туберкулезе, заболеваниях крови, сахарном диабете, беременности, внутриматочной спирали, тесной синтетической одежде, гемодиализе и др.), развивается кандидоз.

Candida spp. попадает в организм половым, контактным путем, а также во время беременности и родов. В 30-40 % случаев кандидоз развивается вследствие половых контактов, однако чаще заболевание обусловлено эндогенной инфекцией, когда при воздействии неблагоприятных факторов, приводящих к нарушению баланса естественной микрофлоры, происходит бурное размножение этих грибов.

Candida обычно поражает слизистые оболочки или кожу. Чаще всего встречается кандидоз слизистой мочеполового тракта, который характеризуется жжением и зудом в половых органах, творожистыми белыми выделениями (налетом), болями при мочеиспускании и иногда появлением мелких пузырьков, эрозий и трещин. Вульвовагинальный кандидоз составляет 75 % всех случаев кандидоинфекции, как правило, это бессимптомное кандидоносительство. Возможно развитие кандидозного эндоцервицита, уретрита или цистита. При кандидозе ротовой полости (псевдомембранозном мукозите, молочнице) появляется белый налет на слизистой оболочке щек, задней стенке глотки и языке. Чаще всего он встречается у новорождённых. У взрослых кандидоз ротовой полости нередко бывает ранним признаком СПИДа. Кандидоз желудочно-кишечного тракта развивается, как правило, после приема антибиотиков широкого спектра действия и характеризуется клиническими признаками колита и/или дисбактериоза кишечника. При кандидозе кожи возникает много мелких пузырьков, на месте которых образуются эрозии с четкими границами. Могут наблюдаться «отсевы» на здоровой коже в виде мелких язв и розовые пятна, шелушащиеся в центре, паронихии, поражение межпальцевых складок кистей и стоп, паховых и подмышечных областей, области заднего прохода. В некоторых случаях происходит генерализация инфекции с инфицированием различных органов (чаще почек, печени, головного мозга, сердца, легких и глаз), формированием вторичных метастатических очагов и появлением симптомов лихорадки, поражения центральной нервной системы, дисфункции органов желудочно-кишечного тракта и изменений периферической крови. Может развиться сепсис, эндокардит, эндофтальмит, инфекция мочевыводящих путей и т. д.

Золотым стандартом в выявлении Candida spp. является микробиологический метод – культивирование на питательных средах (посев на среду Сабуро). Определение чувствительности выделенных микроорганизмов к противогрибковым (антимикотическим) препаратам используется главным образом при недостаточной эффективности лечения или при переходе от парентеральных противогрибковых препаратов одного класса на пероральные препараты другого класса (например, флуконазол) при необходимости длительного лечения кандидозной инфекции (например, при кандидозном менингите, эндокардите или остеомиелите).

Для чего используется исследование?

Для выявления кандидоза.
Для дифференциальной диагностики (наряду с другими исследованиями) при заболеваниях, протекающих со сходными симптомами (бактериальном вагинозе, трихомониазе, генитальном герпесе, неспецифическом вагините и др.).
Чтобы выбрать рациональную противогрибковую терапию и оценить ее эффективность.
Когда назначается исследование?

При подозрении на грибковую инфекцию, в том числе после антибактериальной терапии и при клинических признаках дисбактериоза кишечника (вздутии и боли в животе, жидком стуле).
При выделениях из влагалища, сопровождающихся зудом.
При противогрибковой терапии (для оценки эффективности лечения).

Специальной подготовки к исследованию не требуется.

Исследование назначается до начала проведения антигрибковой терапии. Порядок сбора ногтевых пластинок
1. Очистить ногтевую пластинку 70% спиртом.
2. Собрать биоматериал одноразовым скальпелем/кюреткой/одноразовым перфоратором.
Наиболее жизнеспособные и многочисленные клетки гриба содержатся в месте активной
инвазии. Для исследования необходимо взять материал из видимых очагов поражения,
предпочитая границы этих очагов с еще неповрежденной тканью ногтя. При подногтевой
дистальной и проксимальной формах возбудитель располагается под ногтевой
пластинкой и внутри ее, при поверхностной форме – в поверхностных слоях пластинки,
при паронихии – в заднем ногтевом валике. Конкретный участок ногтя, из которого
следует брать материал, определяется типом поражения и клинической формой
онихомикоза (см. таблицу ниже).
3. Крупные фрагменты ногтевой пластинки необходимо измельчить до частиц размером
1-2 мм.
4. Материал поместить в стерильную пробирку с желтой крышкой.
Необходимо собрать достаточное количество клинического материала (не менее 1 см2
) с
учетом проведения двух исследований (микроскопия и посев).
5. Промаркировать контейнер в соответствии с направительным бланком.
Порядок сбора чешуек кожи
1. Очистить пораженный участок 70% спиртом.
2. Собрать чешуйки кожи одноразовым скальпелем/кюреткой. С помощью пинцета
собрать несколько поврежденных волос с луковицами из видимого очага поражения.
3. Волосы измельчить ножницами.
4. Материал поместить в сухую микропробирку (типа Эппендорф) без транспортной
среды или на предметное стекло (сверху накрыть другим предметным стеклом, взятый
материал между стеклами поместить в полиэтиленовый пакет и зафиксировать
резинкой).
Необходимо собрать достаточное количество клинического материала (не менее 0,5 см2
)
с учетом проведения двух исследований (микроскопия и посев).
5. Промаркировать контейнер/предметное стекло в соответствии с направительным
бланком. При подозрении на поражение отрубевидным лишаем (возбудитель Malassezia
furfur) сделать соответствующую отметку в направительном бланке. Сбор волос: Волосы должны быть чистыми и тщательно просушенными.
Не допускается перед анализом нанесение на волосы средств по уходу и укладке.
Рекомендуется прекратить использование лечебных шампуней, средств против перхоти, муссов, лечебных бальзамов и гелей за 2 недели до сдачи волос на анализ.
Если Вы применяете препараты типа “Антиседин”, то их использование необходимо прекратить за 3 месяца до анализа.
Перед процедурой срезания волос тщательно вымыть руки. Не рекомендуется использовать перчатки из латекса.
Инструмент для срезания волос (ножницы или бритва) должен иметь очищенные режущие поверхности.
Волосы необходимо аккуратно отстричь (не выдергивать!) в непосредственной близости от корней в четырех-пяти местах на затылке ближе к области шеи.
Желательно оставить длину отстриженных волос 3 – 5 см от корней, а лишнее обрезать.
Срезанные волосы собрать в пучок толщиной 2 – 3 мм и поместить во внутренний маленький конверт. В зоне конверта, где расположен корневой конец пряди сделать надпись «корень».
Если волосы очень короткие, то их необходимо состричь в количестве, способном заполнить чайную ложку.
При отсутствии волос на голове, их можно компенсировать с любой другой части тела, сделав соответствующую пометку в бланке заказа.

Референсные значения: отрицательно.

Выявление Сandida spp. в биоматериале из стерильных в норме органов и тканей свидетельствует об этиологической роли этих грибов в развитии заболевания.

Отрицательный результат

Кандидоз маловероятен.
Положительный результат

Кандидоз.
Сочетание вагинального кандидоза с бактериальным вагинозом.
Что может влиять на результат?

Предшествующая противогрибковая терапия, нарушение правил взятия анализа и задержка отправления биоматериала в лабораторию способствуют ложноотрицательному результату.