Вирусы гриппа А, A/H1N1pdm2009 («свиной грипп») и В, качественное определение РНК

Influenza virus A/H1 – один из подтипов вируса гриппа, характеризующийся особой вирулентностью и приводящий к тяжелым формам заболевания и пандемиям. Грипп, вызванный Influenza virus A/H1 (грипп свиней, свиной грипп), отличается от сезонного (эпидемического) гриппа по нескольким характеристикам. Во-первых, возбудитель гриппа свиней – это новый вариант вируса гриппа, возникший в организме свиней в результате мутаций его генетического материала и затем распространившийся в популяции человека. Большинство людей не имеют иммунитета к нему, поэтому заболевание характеризуется очень высокой заразностью. Кроме того, оно чаще протекает в более тяжелой форме с вовлечением нижних отделов респираторного тракта и с осложнениями (в виде пневмонии, дыхательной и почечной недостаточности, энцефалопатии и др.), что обуславливает необходимость раннего и интенсивного лечения. Поэтому диагностика гриппа свиней должна быть произведена в кратчайшие сроки. На основании опыта борьбы с пандемией гриппа Influenza A H1/N1 в 2009 году был сделан вывод, что “золотым стандартом” идентификации этого подтипа вируса является полимеразная цепная реакция в режиме реального времени – метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в отделяемом носоглотки) фрагменты генетического материала (РНК) возбудителя инфекции. Такое исследование позволяет получить максимально точный результат в кратчайшие сроки.

РТ-ПЦР относится к так называемым быстрым методам диагностики гриппа, обеспечивающим возможность постановки окончательного, лабораторно подтвержденного диагноза еще до начала лечения. Это преимущество отличает РТ-ПЦР от выделения вируса в культуре клеток (требует 7-10 дней) и большинства серологических методов (требуют нарастания титра антител, 10-14 дней).

Так как серотипы и подтипы вируса гриппа отличаются друг от друга по некоторым генетическим последовательностям (например, по гену белка гемагглютинина, H1), с помощью исследования РТ-ПЦР возможно идентифицировать конкретный подтип вируса (Influenza A/H1). Специфичность этого анализа составляет 98-100 %. Среди “быстрых” тестов только РТ-ПЦР способна дифференцировать подтип вируса гриппа свиней от других подтипов Influenza A. Положительный результат исследования указывает на наличие генетического материала Influenza A/H1 в образце, однако не всегда означает продолжающуюся репликацию вируса, так как в реакции определяется не сам вирус, а фрагменты его РНК. По этой же причине положительный результат исследования биоматериала, взятого на фоне начатого противовирусного лечения, не означает его неэффективность.

Чувствительность исследования составляет 86-100 %. Это самый высокий показатель среди других “быстрых” диагностических тестов. Например, чувствительность экспресс-тестов для определения антигена вируса гриппа в отношении Influenza H1/N1 составляет 10-70 %, а чувствительность прямого и непрямого метода иммунофлюоресценции – 47-93 %. Важно отметить, что несмотря на это возможность ложноотрицательного результата все же существует. В отличие от большинства других лабораторных методов, результат РТ-ПЦР в меньшей степени зависит от распространенности гриппа среди населения, однако необходимо помнить, что частота ложноотрицательных результатов выше в период эпидемии. Для более точной постановки диагноза рекомендуется повторное (многократное) исследование образцов разных биоматериалов (отделяемого носоглотки, ротоглотки, мокроты) с интервалом 48-72 часа. Причем отрицательный результат РТ-ПЦР полностью не исключает диагноза “грипп Influenza A/H1” и не препятствует назначению противовирусной терапии.

Для чего используется исследование?

Для диагностики Influenza A/H1-гриппа.
Когда назначается исследование?

При постановке диагноза “грипп, среднетяжелая/тяжелая форма” и при осложнениях гриппа (пневмония, дыхательная недостаточность, энцефалопатия и др.).
При постановке диагноза “грипп” у пациента с факторами риска гриппа Influenza A/H1: возраст до 2 лет и старше 65 лет, беременность, хроническая обструктивная болезнь легких, хронические заболевания сердца, почек, печени, сахарный диабет, иммуносупрессия.
При отсутствии улучшения или при ухудшении состояния в течение 72 часов после постановки диагноза “грипп, легкая форма” у пациента без факторов риска Influenza A/H1.
При обследовании пациента, контактировавшего с больным с установленной Influenza A/H1-инфекцией.

Важное место занимает подготовка к исследованию. Чтобы результат анализа был максимально достоверен, взятие мазка из носоглотки и ротоглотки производится в следующих условиях:

Натощак (или не ранее, чем через 2-3 часа после приема пищи).
Перед полосканием, орошением слизистой оболочки, применением капель или рассасыванием таблеток.
До назначения антибактериальных препаратов (или не ранее, чем через трое суток после их отмены).
С исключением чистки зубов, жевания резинки, питья воды, интенсивного высмаркивания и пользования гигиеническими средствами (крема, мази).

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

Influenza A/H1-инфекция.
Причины отрицательного результата:

отсутствие Influenza A/H1-инфекции.

Важные замечания

Оптимально брать биоматериал через 48-72 часа после начала заболевания. Несмотря на то что идентификация вируса гриппа с помощью РТ-ПЦР возможна в течение более длительного времени от начала заболевания по сравнению с большинством других тестов, биоматериал должен быть получен как можно раньше. У детей, а также при вовлечении нижних отделов респираторного тракта этот период более длительный.
Отрицательный результат не препятствует назначению противовирусной терапии.
Положительный результат исследования биоматериала, взятого на фоне начатого противовирусного лечения, не означает его неэффективность.