Антинуклеарный фактор на клеточной линии HEp-2, полуколичественное определение (непрямая иммунофлуоресценция)

Определение антинуклеарного фактора (АНФ) является “золотым стандартом” выявления антинуклеарных антител (АНА) и диагностики аутоиммунных заболеваний.

Патогенез системных заболеваний соединительной ткани (СЗСТ) тесно связан с нарушениями в иммунной системе и повышенной выработкой антител к структурам собственных клеток. Аутоантитела к компонентам ядра клеток – антинуклеарные антитела – взаимодействуют с нуклеиновыми кислотами и белками ядра, антигенами цитоплазмы, что проявляется воспалительными изменениями в тканях и органах, болями в суставах и мышцах, выраженным утомлением, потерей веса, кожными изменениями. АНА обнаруживаются при многих аутоиммунных заболеваниях, но наиболее характерны для системной красной волчанки (СКВ). АНА встречаются более чем у 90 % больных системными заболеваниями соединительной ткани, в настоящее время описано около 200 разновидностей, которые объединены единым названием – антинуклеарный фактор.

При определении АНФ методом непрямой флюоресценции чаще используется перевиваемая линия эпителиальных клеток аденокарциномы гортани человека НЕр-2. Клетки НЕр-2 являются очень удобным субстратом для лабораторного исследования, так как обладают крупными ядрами и на стеклах растут в один слой. АНА выявляются при связывании с внутриклеточными антигенами клеток НЕр-2.

При исследовании эпителиальные клетки НЕр-2 выращивают на стеклах, фиксируют и инкубируют с разведенной сывороткой крови пациента. После удаления избытка сыворотки клетки инкубируют с меченными флюоресцеином антителами, затем снова промывают и исследуют с помощью флюоресцентного микроскопа. При этом определяется титр антител и тип свечения. Диагностически значимым считается титр более 1:160. При обострении ревматических заболеваний он превышает 1:640, а в период ремиссии снижается до 1:160-1:320. Чем больше антител, тем выше титр. По типу свечения можно установить мишени антинуклеарных антител, что имеет важное клиническое значение и определяет тактику дальнейшего обследования пациента. Основными являются периферический, гранулярный (мелко-/крупно-), ядрышковый, центромерный и цитоплазматический типы окрашивания ядра. Каждому типу свечения присущи очень характерные признаки, которые позволяют отличить один вариант от другого.

Гомогенное (диффузное) окрашивание связано с наличием антител к двуспиральной ДНК, гистонам и характерно для СКВ и лекарственной волчанки.

Периферическое свечение обусловлено периферическим распределением хроматина в ядре, связано с антителами к ДНК и специфично для СКВ. Данный тип свечения важно дифференцировать от окрашивания ядерной мембраны, которое происходит при аутоиммунных заболеваниях печени.

Гранулярное (крапчатое, сетчатое) окрашивание встречается наиболее часто и является наименее специфичным, выявляется при многих аутоиммунных заболеваниях. Аутоантигенами в данном случае выступают нуклеопротеиновые комплексы в ядре (Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигены и PCNA).

Очень высокие титры АНФ с крупногранулярным типом свечения часто указывают на смешанное заболевание соединительной ткани.

Взятие крови производится натощак (не менее 8 и не более 14 ч голодания). Можно пить воду без газа.
Воздержаться от курения за 30 минут.
Прием лекарств и необходимость их отмены следует обсудить с врачом за 7-10 дней до сдачи крови.
Физиотерапевтическое лечение, инструментальные обследования нужно проводить после процедуры забора биоматериала.

Причины повышения титра АНФ на HEp-2 клетках:

cистемная красная волчанка (в 95 % случаев),
дерматомиозит/полимиозит,
системная склеродермия (в 60-90 % случаев),
синдром Шегрена (в 40-70 % случаев)
смешанное заболевание соединительной ткани (синдром Шарпа),
синдром Рейно,
дискоидная волчанка,
лекарственная волчанка,
ревматоидный артрит,
некротизирующий васкулит,
инфекционный мононуклеоз,
лейкемия,
злокачественные новообразования (преимущественно лимфома),
тяжелая миастения,
инфекционный эндокардит,
хронический аутоиммунный гепатит,
первичный билиарный цирроз печени,
туберкулез,
пневмокониоз,
интерстициальный фиброз легких.